台湾地区拟制定食品中氯霉素类抗生素残留量的检验方法

2014-03-20 13:50:25来源: 食品伙伴网

  2014年3月13日,台湾地区"卫生福利部"发布部授食字第1031900266号公告,预告制定"食品中动物用药残留量检验方法-氯霉素类抗生素之检验"草案,20日内接收公众意见或建议。

  食品中动物用药残留量检验方法-氯霉素类抗生素之检验草案

  1. 适用范围:本检验方法适用于农畜禽水产品之肌肉、蛋类、内脏、乳汁及蜂蜜中氯霉素(chloramphenicol)、甲磺氯霉素(thiamphenicol)、氟甲磺氯霉素(florfenicol)及氟甲磺氯霉素胺(florfenicol amine)之检验。

  2. 检验方法:检体经萃取及净化后,以液相层析串联质谱仪(liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS)分析之方法。

  2.1. 装置:

  2.1.1. 液相层析串联质谱仪:

  2.1.1.1. 离子源:电洒离子化(electrospray ionization, ESI)。

  2.1.1.2. 层析管:XSELECT HSS PFP,2.5 μm,内径 2.1 mm × 10 cm ,或同级品。

  2.1.2. 离心机(Centrifuge):可达3200 × g以上者。

  2.1.3. 振荡器(Shaker)。

  2.1.4. 均质机(Homogenizer)。

  2.1.5. 氮气蒸发装置(Nitrogen evaporator)。

  2.1.6. 固相真空萃取装置(Solid phase extraction vacuum manifolds)。

  2.1.7. 旋涡混合器(Vortex mixer)。

  2.2. 试药:甲酸与甲醇均采用液相层析级;正己烷、乙酸乙酯、氨水(30%)、三氯醋酸(trichloroacetic acid)及醋酸均采用试药特级;去离子水(比电阻于 25℃ 可达 18 MΩ/cm以上);氯霉素、甲磺氯霉素、氟甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素胺对照用标准品;chloramphenicol-d5、thiamphenicol-d3、florfenicol-d3及florfenicol amine-d3同位素内部标准品。

  2.3. 器具及材料:

  2.3.1. 容量瓶:1 mL及100 mL.

  2.3.2. 离心管:50 mL,PP材质。

  2.3.3. 固相萃取匣(Solid phase extraction cartridge):Oasis MCX,6 mL,150 mg,或同级品。

  2.3.4. 滤膜:孔径0.22 μm,PVDF材质。

  2.4. 试剂调制

  2.4.1. 50%甲醇溶液:

  取甲醇50 mL,加去离子水使成100 mL.

  2.4.2. 5%醋酸溶液:

  取醋酸5 mL,加去离子水使成100 mL.

  2.4.3. 5%三氯醋酸溶液:

  称取三氯醋酸50 g,以去离子水溶解使成1000 mL.

  2.4.4. 含0.6%氨水之乙酸乙酯溶液:

  取氨水20 mL,加乙酸乙酯使成1000 mL.

  2.4.5. 含3%氨水之甲醇溶液:

  取氨水10 mL,加甲醇使成100 mL.

  2.4.6. 25%甲醇溶液:

  取甲醇25 mL,加去离子水使成100 mL.
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  2.5. 移动相溶液之调制:

  2.5.1. 移动相溶液A:

  取甲酸1 mL,加去离子水使成1000 mL,以滤膜过滤,取滤液供作移动相溶液A.

  2.5.2. 移动相溶液B:甲醇。

  2.6. 标准溶液之配制:

  取氯霉素、甲磺氯霉素、氟甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素胺对照用标准品各约10 mg,?确称定,分别以50%甲醇溶液溶解并定容至100 mL,作为标准原液,于 -20℃ 贮存。临用时分别取适量各标准原液混合,以50%甲醇溶液稀释至0.003~2.5 mg/mL,供作标准溶液。

  2.7. 内部标准溶液之配制:

  取chloramphenicol-d5、thiamphenicol-d3、florfenicol-d3及florfenicol amine-d3同位素内部标准品各约10 mg,?确称定,共置于100 mL容量瓶中,以50%甲醇溶液溶解并定容,供作内部标准溶液,于 -20℃ 贮存。

  2.8. 检液之调制:

  2.8.1. 萃取:

  2.8.1.1. 肌肉:

  将检体细切均质后,取约5 g,精确称定,置于离心管中,加入内部标准溶液50 mL及含0.6%氨水之乙酸乙酯溶液20 mL,旋涡混合1分钟,振荡10分钟,以3200×g离心10分钟,取上清液。加入5%醋酸溶液2 mL,旋涡混合1分钟,取下层液,于45℃水浴中以氮气浓缩至约2 mL,加入5%醋酸溶液4 mL,旋涡混合后,供净化用。

  2.8.1.2. 蛋与内脏:

  将检体混匀后,取约5 g,精确称定,置于离心管中,加入内部标准溶液50 mL及5%三氯醋酸溶液20 mL,旋涡混合1分钟,振荡10分钟,以3200×g离心10分钟,取上清液,加入正己烷20 mL,旋涡混合1分钟,以3200×g离心5分钟,取下层液供净化用。

  2.8.1.3. 乳汁:

  将检体混匀后,精确量取5 mL,置于离心管中,加入内部标准溶液50 mL及5%三氯醋酸溶液20 mL,旋涡混合1分钟,振荡10分钟,以3200×g离心10分钟,取上清液供净化用。

  2.8.1.4. 蜂蜜:

  将检体混匀后,取约5 g,精确称定,置于离心管中,加入内部标准溶液50 mL及5%醋酸溶液10 mL,旋涡混合1分钟,振荡10分钟,供净化用。

  2.8.2. 净化:

  取2.8.1.节供净化用溶液,注入预先以甲醇5 mL及去离子水 5 m L润洗之固相萃取匣,弃流出液,以5%醋酸溶液5 mL流洗,弃流出液,再以含3%氨水之甲醇溶液5 mL冲提,收集冲提液,于45℃水浴中以氮气浓缩至干,再以25%甲醇溶液定容至1 mL,经滤膜过滤后,供作检液。

  2.9. 基质匹配检量线之制作:

  取空白检体,不添加内部标准溶液,依2.8.节萃取、净化及以氮气浓缩至干后,分别添加不同浓度标准溶液0.5 mL及内部标准溶液50 mL,再以去离子水定容至1 mL,经滤膜过滤后,依下列条件进行液相层析串联质谱分析。就各氯霉素类抗生素与内部标准品之波峰面积比,与对应之各氯霉素类抗生素浓度,制作基质匹配检量线。

  液相层析串联质谱测定条件(注):

  层析管:XSELECT HSS PFP,2.5 μm,内径2.1 mm × 10 cm.

  移动相溶液:A液与B液以下列条件进行梯度分析

  更多检测方法请见:http://www.xmtbt-sps.gov.cn/detail.asp?id=45928

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